尊龙凯时淋巴母细胞HMy2CIR培养说明书

一、细胞培养条件

尊龙凯时的HMy2CIR细胞培养需在严格的无菌条件下进行。细胞在运输后应迅速进行处理，待其恢复至健康状态后，加入完全培养液并密封瓶口，这是最佳的运输方式。收到细胞后，首先用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台内进行操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中，静置3-4小时以稳定细胞状态，随后可进行后续操作。建议在显微镜下观察细胞生长状态，并进行拍照存档（最佳倍数为40x、100x和200x各一张），前三天的照片将作为售后服务的关键依据。如果未提供照片，则默认细胞状态良好。

二、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请收集培养瓶内的完全培养液至离心管中，留5毫升用于继续培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 为细胞添加约1-2毫升的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若细胞大多数已变圆且脱落，快速转回操作台，轻敲培养瓶后添加5毫升以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15毫升离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2毫升的完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（例如两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8毫升，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
2. 添加约1毫升的0.25%胰蛋白酶消化液，观察至细胞回缩变圆后，加入5毫升完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15毫升离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1毫升尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如果后续需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具）并迅速置于37℃水浴中解冻，直至管内无结晶后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5毫升完全培养基的15毫升离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重新用5毫升完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放在37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基并继续培养。

三、注意事项

部分细胞可能在运输过程中因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。若脱离现象严重，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养（备后期对比培养），沉淀加入1-2毫升胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5毫升完全培养基以终止反应，再进行离心和重悬。随即按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至每瓶5-8毫升，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

四、售后条款

若细胞出现问题，我们提供以下可重发的情况：

1. 细胞运输过程中发生丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等。
2. 收到细胞48小时内，如出现污染问题，需提供真实实验结果以便核实后补发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰运输的细胞复苏后24小时内，若未存活需提供清晰的细胞状态照片。
4. 如细胞在复苏24小时后污染，同样可重发。
5. 客户需在7天内提供实验结果以证明细胞活性问题，经核实后予以重发。
6. 在收到当天及第2、3天请拍照，如未告知，则视为产品合格；如在4-7天内出现问题并提供前三天照片以及详细操作步骤，经技术人员判定为我方责任的，予以重发。

不予重发的情况包括：

1. 因客户自身造成的细胞污染。
2. 客户不正确操作导致细胞状态不佳。
3. 不符合本库推荐的细胞培养体系。
4. 未提供细胞培养前三天的照片则不予重发。
5. 细胞在培养时经过其它处理的不予重发。
6. 在收到后2天内未告知问题的。
7. 具体情况将另行商议。