细胞因子在评估免疫细胞功能方面扮演着重要角色。然而,这些关键分子在体外诱导和检测时却显得十分敏感,稍有不慎就可能导致实验结果的偏差。你是否因此感到困扰?今天,尊龙凯时将为你带来解决方案,从实验原理到注意事项,帮助你轻松应对,告别无效实验!
一、为何需要对细胞因子进行体外诱导和检测
细胞因子是一类由免疫及非免疫细胞分泌的小分子蛋白,通过动态网络调节免疫反应、炎症反应及组织修复等重要生物过程。例如,M1型巨噬细胞分泌促炎性细胞因子(如TNF-α、IL-1α、IL-6等)以促进炎症反应,但持续的炎症可能导致组织损伤。相比之下,M2型巨噬细胞分泌抑炎性细胞因子(如IL-10、TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF),帮助减轻炎症并促进修复。因此,在评估免疫细胞功能时,细胞因子不可替代。
由于细胞因子属于分泌性蛋白,其胞内含量通常较低,无法通过流式细胞术直接检测,因此需对目标细胞进行分选并在体外刺激后再进行检测。同时,为验证特定基因或处理方式(如药物或抑制剂)对目标细胞的影响,需进行诱导处理使其转变为特定细胞亚群,如诱导Th1/Th2/Th17细胞或M1/M2型巨噬细胞,此时细胞因子的诱导表达和检测尤显重要。
二、体外诱导和检测细胞因子时需注意的细节
尽管常用细胞因子的体外诱导模型在文献中易于找到,但在实际操作过程中,实验结果可能不如预期。尊龙凯时的专家为您总结了以下影响因素:
- 细胞活性:某些细胞(如NK细胞、小胶质细胞)的活性容易受环境影响,因此在处理细胞时需轻柔,避免损伤。在进行下游诱导表达前,建议进行细胞活性检测并去除死细胞,以确保结果准确。
- 细胞亚群间的相互影响:不同细胞亚群之间可能相互抑制或转化,例如TH1与TH2细胞。选择诱导细胞时需谨慎,比如在诱导Th2细胞时,使用初始CD4T细胞效果会比总CD4T细胞更佳,能够排除Th1的影响。
- 诱导试剂的活性:同一诱导试剂不同厂家之间可能存在纯度和活性差异,因此需提前确认,选择纯度和活性更高的试剂。同时,部分试剂不能反复冻融,或者溶解后活性下降快,因此需注意保存条件,并尽量分装保存。
- 刺激阻断的影响:在细胞因子检测中,常用刺激阻断剂处理。然而部分细胞因子对刺激阻断敏感,处理后的检测效果可能会下降。在使用刺激阻断剂前,应确认其必要性并优化处理时间。
三、尊龙凯时细胞鉴定试剂盒
在上述实验细节中,无论是细胞活性波动、亚群相互干扰,还是试剂稳定性不足,都可能成为实验结果的“隐形杀手”。为帮助科研人员解决细胞模型构建中的常见问题,尊龙凯时推出了一系列细胞鉴定试剂盒,包含分化诱导试剂和鉴定试剂,性能优异、结果重复性佳。
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