尊龙凯时人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10%FBS+1%丙酮酸钠+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

传代方法：首次建议以1:2比例进行传代

备注：使用无菌离心管收集瓶中的培养基，以便进行对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，应将其培养至良好状态，灌满完全培养液并妥善封口，以确保运输细胞的最佳状态。收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，放置于超净工作台内进行无菌操作。然后，将细胞瓶放入37℃，5%CO2的培养箱中静置3-4小时以恢复细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并在不同倍数下拍照保存（建议40x,100x,200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片则默认收到的细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，收集培养液至离心管中，并保留5ml培养基，置于37℃、5%CO2孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速取出，加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞直至完全脱落后吸出，并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 以1:2的比例进行分瓶传代（即分配至两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃，5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，反转观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使之脱落，并转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，将沉淀细胞加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，务必在-80℃保存24小时以上后再转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无晶体，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞并接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
4. 次日，继续使用新鲜的完全培养基进行培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会出现脱落现象，这是正常的。如脱落严重，可将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作对比培养。沉淀后加入胰蛋白酶1-2ml，轻轻吹打后再消化1-2分钟，终止反应后离心并重悬，最终按照1:2的比例进行分瓶传代，补充新完全培养基至每瓶5-8ml，放入37℃，5%CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

如细胞出现问题的重发情形包括但不限于：运输过程中出现细胞丢失、破损或严重漏液等情况；细胞污染请在收到产品48小时内报告真实实验结果，经核实后可重发；常温发货细胞在静置24小时后，及干冰冻存发货细胞在复苏后24小时内，若未存活（需提供清晰的细胞状态照片），也可重发。注意细胞活性问题需在收到产品7天内反馈。

不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染、操作不当导致细胞状态不佳、未使用尊龙凯时推荐的培养体系、以及收到细胞后2天内未反馈等。具体问题需视具体情况而定。