稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）是评估抗菌剂抑制微生物生长能力的实验技术，主要包括微量稀释法和常量肉汤稀释法两种方法。琼脂稀释法因其操作简便、成本低廉，特别适合高通量筛选和自动化操作，因此广泛应用于生物医疗研究中。肉汤稀释法则更为直观，易于操作，适合实验室规模的测试，可根据需求灵活调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

1. 原理：本试验采用琼脂稀释法将不同浓度的抑菌剂混合并溶解于琼脂培养基中，随后接种细菌。通过观察细菌的生长情况，可以确定抗（抑）菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。该方法特别适用于不溶性抗（抑）菌产品。

2. 操作步骤：
（1）抗（抑）菌溶液的配制：进行无菌操作，取5ml或5g的样品，溶解于45ml的灭菌磷酸缓冲液中，制成10%的均匀分散溶液或悬液。
（2）含抗菌剂培养基的配制：将10%的抗（抑）菌溶液用PBS进行对倍系列稀释获得不同浓度的受试液，并在45℃～50℃水浴中恒温备用。
（3）准备双倍浓度的培养基：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中，加热至沸腾，121℃灭菌15分钟，随后在45℃～50℃水浴中备用。
（4）含抗（抑）菌液的培养基配制：将10ml的系列稀释抗菌液加入平皿，再加入10ml双倍MH琼脂培养基，摇晃混匀待其凝固后备用。
（5）接种：用加样器取1μl～2μl的菌悬液（约107cfu/ml）点种于含抗（抑）菌液的平皿，形成直径约5mm～8mm的菌液圈。
（6）阳性对照接种：以相同方法接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板。
（7）培养观察：将接种后的平板置于35℃培养箱中倒置培养18h～24h，观察结果。

3. 评判标准：菌落生长被完全抑制的最低抗（抑）菌液浓度即为该样品对受试菌的MIC，单一菌落生长可忽略不计。

营养肉汤稀释法

1. 原理：本试验将不同浓度的抑菌剂混合溶解于营养肉汤培养基中，接种细菌，通过细菌的生长情况确认抗（抑）菌剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC），此法适用于可溶性抑菌产品。

2. 操作步骤：
（1）制备金黄葡萄球菌及大肠杆菌的悬液；
（2）含抗菌剂培养基的配制：将抗（抑）菌溶液用蒸馏水进行对倍稀释，取各稀释度25ml加入到含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中；
（3）接种：取0.1ml、大约108cfu/ml的菌悬液接种于含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管中；
（4）阳性对照：以同样方法接种不含抗（抑）菌剂的试管；
（5）阴性对照：取两支含营养肉汤的试管；
（6）培养观察：将样本放置于37℃培养箱中培养48小时，观察结果；
（7）活菌计数：确保试验用菌悬液含菌量在5×10^5 cfu/ml至5×10^6 cfu/ml之间。

3. 评判标准：阳性对照管中有细菌生长（混浊），而阴性对照管中无菌生长（透明），在此条件下试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗（抑）菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。

在生物医疗研究中，尊龙凯时的抗菌产品展现了卓越的抑菌效果，为各种微生物相关疾病的防治提供了可靠的方案。通过精确的MIC测定，尊龙凯时持续推动着医学领域的革新与进步。